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2025/9/23 18:25:31/
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嵌合抗原受体#xff08;CAR#xff09;是经过改造后赋予T细胞靶向特定抗原的新能力的受体蛋白。这些受体是嵌合的#xff0c;因为它们将抗原结合和T细胞激活功能结合到一个受体中。CAR-T细胞疗法使用经过CAR改造的T细胞来治疗癌症。CAR-T免疫疗法的前提是修改T细…一、概述
嵌合抗原受体CAR是经过改造后赋予T细胞靶向特定抗原的新能力的受体蛋白。这些受体是嵌合的因为它们将抗原结合和T细胞激活功能结合到一个受体中。CAR-T细胞疗法使用经过CAR改造的T细胞来治疗癌症。CAR-T免疫疗法的前提是修改T细胞识别癌细胞以便更有效地靶向和消灭它们。科学家从人体中获取T细胞对其进行基因改造然后将产生的CAR-T细胞注入患者体内以攻击他们的肿瘤。 二、使用细胞计数仪监控CAR-T细胞疗法的生产
自2018年首次获得FDA批准以来CAR-T疗法已使血液恶性肿瘤患者的缓解率达到80%。与所有过继细胞疗法一样自体或同种异体CAR-T疗法的生产是一个复杂的生物制造过程需要严格遵守监管和QA/QC指南。为了确保最终产品的安全性、质量和功效必须在整个开发和生物加工流程的过程中评估和监控细胞的健康和活力。在此我们演示了如何使用LUNA-FX7细胞计数仪来监测和评估CAR-T过程中关键阶段的细胞健康状况
1收集主要来源材料
2白细胞分离后
3分离/激活
4扩增
5生产
使用核酸染色剂吖啶橙和碘化丙啶AO/PI在荧光细胞计数模式下使用LUNA-FX7进行细胞计数。简而言之对于每次计数将2 μl预混合AO/PI溶液与18μl细胞混合装入2、3或8通道载玻片中并利用自动对焦功能进行计数。对于最终剂量测定使用分析体积为5.1 μl大多数自动化体积的10倍的LUNA 1通道载玻片。 1. 全血样本的初始白细胞浓度和活力
在采血完成后和进行白细胞分离前用1x PBS按1100稀释细胞以便在LUNA-FX7中计数。尽管白细胞(WBC)仅占全血的2%但如图展示了如何轻松区分异质群体中的有核细胞和无核细胞红细胞。 明场(BF)、绿色通道(GF)和红色通道(RF)的平铺图像(A)。标记的(活/死有核细胞)图像的叠加图像(B、C)。1/100稀释血液的白细胞总数和活力(D) 荧光细胞计数模式下CAR-T细胞的实验方案参数设置 2. 白细胞的分离 白细胞去除术是从全血中分离白细胞的过程。下图显示了2个不同样品的活力。两个样本中均未发现红细胞但仍可观察到一些细胞碎片。同样LUNA-FX7可以轻松区分细胞和细胞碎片最大限度地减少误报计数的可能性。 白细胞分离后的细胞浓度和活力。白细胞分离后的WBC样本计数以及BF、GF和RF原始图像(A)、FL标记图像和放大图像(B、C)。评估两个样品并绘制细胞浓度和活力图DE
3. T细胞分离和激活
白细胞分离后T细胞被进一步分离并激活产生同质T细胞群。此阶段样本质量存在明显对比。 分离和激活后对T细胞进行计数以及BF、GF和RF原始图像(A)、FL标记图像和放大图像(B、C)。假阳性碎片可以通过最小细胞大小设置(D)来消除。评估两个样品并绘制细胞浓度和活力图E、F 4. CAR表达的T细胞
分离并激活的 T 细胞通过逆转录病毒转导产生嵌合抗原受体 (CAR)。转导后新设计的CAR-T细胞再离体扩增。下图显示了细胞活力和扩增的CAR-T细胞数量。 CAR-T细胞扩增后的细胞浓度和活力。CAR-T细胞样本的原始图像和标记图像A、B、C以及细胞浓度和活力D、E 5. CAR-T细胞产品
扩增的CAR-T细胞被冷冻保存并评估剂量。如图显示具有不同细胞活力的2个样品的活力和浓度。 CAR-T细胞最终产品的细胞浓度和活力。低活力样品(A)和高活力样品(B)以及相应的细胞浓度和活力(C、D)的标记图像 结论 从最初收集主要原材料到最终剂量确定LUNA-FX7™满足在整个CAR-T生产过程中监测细胞健康和活力的需求。此外结合预设的验证载玻片、内部QC软件和可选的21 CFR Part 11合规软件可确保满足和维持严格的QC和监管指南。 三、点成生物细胞计数解决方案
点成Aligned Genetics为用户提供了先进的自动细胞计数仪设备设备具有极高的精确度和可重复度单次最多可检验8个样品细胞计数浓度范围广内置QC软件提供值得信任的数据还符合21 CFR PART 11法规。 关于点成生物
点成生物与多家先进的国际仪器制造商Grant、Nuve、Cellix、Microfluidic ChipShop、Beonchip、Aligned Genetics等进行深度合作专注于生命科学、温度控制、临床应用、微流控等领域提供的产品有水浴、摇床、混匀器、离心机、移液枪、恒温振荡器、培养箱、蒸馏水机、程序降温仪、微流控芯片及分析系统、细胞计数仪等常用实验仪器致力于生物科技领域产品和解决方案————————————————
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