一、阿尔茨海默病早期诊断为何亟需更灵敏的血液标志物？

阿尔茨海默病（AD）是一种在临床症状出现前数十年即开始发生神经病理改变的疾病。早期、精准诊断对于疾病干预和临床试验至关重要。传统上，AD诊断依赖于脑脊液生物标志物检测（如Aβ42，p-tau）或昂贵的正电子发射断层扫描（PET）成像。然而，脑脊液采集具有侵入性，PET成本高昂且可及性有限，限制了其在大规模筛查和动态监测中的应用。因此，开发基于血液（血浆/血清）的高灵敏度、高特异性的AD生物标志物，是实现无创、便捷、低成本早期诊断和病程监控的核心方向。Tau蛋白的异常过度磷酸化是AD的核心病理特征之一，其特定磷酸化位点的片段（如p-tau181，p-tau217）已显示出在血液中检测的潜力。但能否发现更早期、更特异的血液标志物，是当前研究的前沿焦点。

二、为何选择p-tau231作为潜在的早期标志物进行探索？

Tau蛋白的磷酸化位点众多，不同位点的磷酸化在疾病进程中的动力学和病理生理意义可能不同。苏氨酸231位点磷酸化的tau蛋白（p-tau231）在AD研究中备受关注。前期脑脊液研究表明，p-tau231水平在AD早期，甚至在淀粉样蛋白病理（Aβ）出现后不久即显著升高，可能比p-tau181等位点的变化更早。这一特性提示，血浆中的p-tau231可能具有成为极早期AD病理（即"萌芽期"病理）血液标志物的独特潜力。然而，血液中p-tau231浓度极低，远低于脑脊液，传统检测方法（如常规ELISA）难以实现可靠定量，这曾是阻碍其临床应用的主要技术瓶颈。

三、超灵敏Simoa技术如何实现血浆p-tau231的精准定量？

为了突破检测灵敏度极限，本研究采用了基于单分子阵列的数字免疫分析技术。该技术通过将单个免疫复合物分离在飞升级的微孔中并进行数字化计数，实现了比传统方法高出1000倍以上的检测灵敏度。

研究团队针对p-tau231开发了高特异性的Simoa检测方法：

-核心试剂：方法的关键在于一对高特异性的单克隆抗体。捕获抗体特异性识别包含磷酸化Thr231位点的tau肽段（氨基酸序列K224…C240），确保只捕获p-tau231；检测抗体则识别tau蛋白的N端区域，并与生物素标记偶联。标准品为体外磷酸化的全长tau蛋白。

-性能验证：该方法对血浆p-tau231的检测下限（LLOQ）达到0.25 pg/mL，在临床样本中的检出率高达98.5%。这证明了该技术具备在极低浓度下稳定、可靠地定量血浆p-tau231的能力，为后续的大规模队列研究奠定了坚实的技术基础。

四、血浆p-tau231在不同队列研究中表现出怎样的诊断性能？

研究在多个独立队列中系统评估了血浆p-tau231的诊断价值，包括发现队列、基于记忆诊所的TRIAD队列、初级保健队列以及神经病理学验证队列。

研究一致发现：

1.优异的诊断区分能力：血浆p-tau231水平在AD痴呆患者中显著高于认知正常的健康老年人、轻度认知障碍（MCI）患者以及非AD神经退行性疾病患者，显示出强大的疾病区分能力。

2.与金标准标志物的高度相关性：血浆p-tau231水平与脑脊液中的p-tau231浓度、PET成像显示的脑内Aβ沉积负荷均表现出极强的正相关性。这证实了血液中的p-tau231信号能够准确反映中枢神经系统的核心病理变化，其升高并非孤立事件。

3.与认知状态和病理分期的关联：血浆p-tau231水平与患者的整体认知功能评分呈负相关，且其浓度随Braak神经原纤维缠结病理分期（反映tau病理严重程度）的进展而逐步升高。

五、相较于p-tau181，p-tau231在疾病进程中是否出现得更早？

研究通过纵向和横向比较，得出了最具洞察力的发现：血浆p-tau231可能是比现有标志物更早出现的病理信号。

1.在Aβ病理背景下的早期响应：在脑内已出现Aβ沉积（Aβ-PET阳性）但尚未痴呆的个体中，血浆p-tau231水平已显著升高，而此时血浆p-tau181的升高尚不明显。这表明，p-tau231对AD病理的反应可能始于疾病更早期的"Aβ阳性但认知正常"阶段。

2.更早的病理阶段区分：依据Braak分期对患者进行分组后发现，血浆p-tau231在病理I-II期（极早期）即显示出诊断价值，而血浆p-tau181的显著升高则出现在更晚的III-IV期。这表明p-tau231能够识别出处于更早tau病理阶段的个体。

3.动态进程中的领先性：将Aβ-PET阳性个体的病理进展进行量化分段后观察到，血浆p-tau231的显著上升发生在疾病进展的较早分段（Q2），而血浆p-tau181和脑脊液p-tau217的显著上升则出现在较晚的分段（Q3）。

六、p-tau231抗体在研究与转化中的核心价值

本研究从概念验证到性能确立的整个过程，高度依赖于特异性的p-tau231抗体。其价值体现在：

1.检测方法开发的基石：高亲和力、高特异性的捕获与检测抗体对，是构建超灵敏Simoa检测方法的绝对核心，决定了检测的特异性和灵敏度上限。

2.机制探索与验证的工具：该抗体使得研究人员能够首次在血浆中准确定量p-tau231，并将其与影像、病理和临床终点关联，从而验证其作为早期标志物的假说。

3.未来临床应用的前提：若血浆p-tau231检测要转化为临床诊断工具，其试剂盒必须基于经过严格验证、性能稳定的p-tau231抗体。这些抗体是实现标准化、可重复检测的保障。