AF594标记的Streptavidin，一种基于生物素-链霉亲和素体系的AF405荧光探针

【试剂简介】

英文名称：Streptavidin, AF594 conjugate，AF594 Streptavidin，AF594标记的Streptavidin，Alexa Fluor594 Streptavidin

中文名称：AF594标记的链霉亲和素，链霉亲和素偶联AF594，链霉亲和素,AF594偶联物

【链霉亲和素AF594偶联物的特性与应用】

链霉亲和素（Streptavidin）是一种来源于阿维丁链霉菌的蛋白质，对生物素（biotin）具有极高的亲和力与特异性。当链霉亲和素与荧光染料Alexa Fluor 594（AF594）共价结合后，形成的偶联物成为一种用于检测与定位的高特异性工具。以下从多个方面对其进行分析说明。

一、结构与作用原理

链霉亲和素由四个相同的亚基组成，每个亚基均可结合一个生物素分子。其与生物素的结合具有解离常数极低、结合速度快且不易受pH值或温度变化影响的特点。AF594是一种磺化罗丹明衍生物，具有较高的荧光量子产度与光稳定性。通过化学偶联，AF594分子被共价连接到链霉亲和素蛋白上，形成稳定的复合物。该复合物保留了链霉亲和素对生物素的高亲和力，同时具备了AF594的荧光特性。

二、光学特性

AF594的最大激发波长约为590纳米，最大发射波长约为617纳米，处于橙红色光谱区域。该染料的荧光强度较高，且对光照漂白具有相对较强的耐受性，适合需要较长时间观察的实验。由于激发波长与常见荧光染料如FITC或DAPI分离度较好，便于进行多色标记与同时检测。

三、主要应用方向

检测分析：在基于生物素-链霉亲和素系统的检测体系中，该偶联物可用于检测已标记生物素的靶分子。例如，在固相分析中，通过生物素化的识别分子捕获目标物，再利用本偶联物进行荧光信号生成与读取。

显微成像：在荧光显微镜技术中，可用于对生物素标记的细胞结构或分子进行定位与可视化。其发射波长适合大多数常规荧光显微镜滤光片配置。

流式分析：在流式细胞术中，可用于检测细胞表面或内部经生物素标记的靶点，实现对特定细胞群的鉴定与分析。

印迹技术：在蛋白质或核酸印迹实验中，作为生物素标记探针的荧光检测试剂，提供一种化学发光法之外的替代性检测方案。

四、使用注意事项

避光操作：荧光偶联物对光敏感，建议在操作和储存过程中尽量减少曝光。

优化浓度：实际使用中需通过实验确定最佳工作浓度，避免因浓度过高导致非特异性结合背景，或浓度过低导致信号不足。

缓冲液兼容性：链霉亲和素在较宽的pH和离子强度范围内保持活性，但应避免含有游离生物素或变性剂的缓冲体系。

样品准备：待测样品中的靶分子需已有效标记生物素，且生物素化步骤不应显著影响识别分子的结合能力。