GST Pull-down是验证蛋白互作的方法之一,常常被用来验证蛋白之间的直接相互作用,除了点对点验证已知的相互作用外,GST Pull-down还可以与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析筛选互作蛋白,即GST Pull-down MS,该方法是通过将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽填料上,充当一种“诱饵蛋白”,与靶蛋白能够相互作用的蛋白就会被拉下。将提取的总蛋白过柱,可捕获与“诱饵蛋白”相互作用的蛋白,洗脱结合物后通过色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析,从而筛选出未知互作蛋白。
背景说明
蛋白质相互作用是生命活动的核心机制,其与肿瘤、神经退行性疾病等密切相关。传统IP技术受限于抗体特异性,GST-PullDown技术通过体外互作体系,可精准捕获直接相互作用。结合高分辨质谱技术,实现未知互作蛋白的深度挖掘。
实验原理
GST Pull-down MS,通过将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽填料上,充当一种“诱饵蛋白”,与靶蛋白能够相互作用的蛋白被拉下。将提取的总蛋白过柱,捕获与“诱饵蛋白”相互作用的蛋白,通过色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析,可筛选出未知互作蛋白。
图 GST Pull-down MS原理
服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——样品制备——酶解消化——肽段纯化——质谱分析——数据检索——生物信息学分析——项目报告
服务内容及说明
适用场景
验证蛋白直接相互作用;
发掘未知互作蛋白;
信号通路与分子机制研究等。
实验周期
致电详询。
实验交付内容
1.实验原始数据;
2.生物信息学分析;
3.结题报告等。